瞬时外向钾通道Kv4.3真核表达载体的构建

• 作者: 卜超志 周涛 江世文
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: Kv4.3 逆转录 载体构建 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 105-109,139
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.02.0018

摘要

[目的]构建Kv4.3真核表达载体,观察其在真核细胞中表达情况.[方法]提取小鼠前额叶皮质RNA,通过RT-PCR和常规PCR技术扩增获得Kv4.3目的基因,利用EcoRⅠ和XbaⅠ限制性内切酶和T4 DNA连接酶将其克隆在pcDNA3.1载体中,并将构建好的重组质粒转染至HEK293细胞中,免疫印迹方法检测Kv4.3蛋白表达.[结果]成功扩增了Kv4.3基因(2 000 bp处有明显条带),先后经酶切和酶连后的重组体转化培养,提取质粒,再通过双酶切观察到2 000 bp处有Kv4.3目的条带和5 400 bp处有pcDNA3.1载体条带.将此重组质粒送去测序,结果显示基因测序结果与GenBank中Kv4.3序列一致.免疫印迹结果发现在HEK293细胞中,转染的重组质粒能够表达Kv4.3蛋白.[结论]成功构建了Kv4.3真核表达载体,其在HEK293细胞中可以稳定表达.