毛细管电泳法筛选人IgG的Fc片段核酸适配体

• 作者: 屈锋 朱超 杨歌 赵丽萍 韩诗邈 黄渊余
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 免疫球蛋白 免疫球蛋白G Fc片段 核酸适配体筛选 毛细管电泳 毛细管电泳-指数富集配体系统进化
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 601-607
• 页数: 7页
• 字数: 5525字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.191761

摘要

基于毛细管电泳-指数富集配体系统进化技术(CE-SELEX)建立了免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段的核酸适配体筛选方法.通过毛细管区带电泳方法分析IgG完整蛋白、Fc与Fab片段的样品的纯度、荷电性质及是否吸附的特征,并比较三者与核酸库的亲和力.结果 表明,IgG与核酸库形成明显的复合物,而Fc和Fab片段与核酸库的亲和力很弱.在筛选Fc片段的适配体时,选择Fab片段作为反筛靶,对去除非特异性结合序列无显著作用.设计了针对Fc片段的适配体筛选方案,在优化的孵育条件(10 mmol/L Na2HPO4-KH2PO4(pH 7.17),0.05 mmol/L Mg2+,37℃孵育25 min)下,经3轮筛选获得Fc片段的核酸适配体Seq Fc1～3,KD值为0.071 ～0.321 μmol/L,经胶体金比色分析方法验证了其亲和力与特异性.