环介导等温扩增技术检测呼吸道样本中肺炎克雷伯菌

• 作者: 叶杨芹 叶蓓 司玉莹 张雯雁 成宇 王岚 王玉超 范列英 赵望
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 环介导等温扩增技术 呼吸道感染 肺炎克雷伯菌 细菌培养法 DNA测序技术
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究生园地
• 页码范围: 56-59,65
• 页数: 5页
• 分类号: R446.5
• 字数: 4353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2020.01.15

摘要

目的 建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法 并进行初步应用.方法 基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法 并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系.结果 8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89％)高于培养法(42.20％),差异有统计学意义(χ2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15％、100％、65.25％,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95％(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817).结论 与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法 .

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王岚	同济大学附属东方医院检验科	32	259	9.0	15.0
2	张雯雁	同济大学附属东方医院检验科	7	26	2.0	5.0
3	叶杨芹	同济大学附属东方医院检验科	4	2	1.0	1.0
4	成宇	同济大学附属东方医院检验科	4	0	0.0	0.0
5	叶蓓	同济大学附属东方医院检验科	2	0	0.0	0.0
6	司玉莹	同济大学附属东方医院检验科	2	0	0.0	0.0
7	赵望	复旦大学环境科学与工程系	2	0	0.0	0.0
8	王玉超	同济大学附属东方医院检验科	1	0	0.0	0.0