毛细管电泳结合电喷雾质谱分析人类癌基因c-myb四链体 核酸与活性天然产物的相互作用

• 作者: David D. Y. CHEN 凡珊珊 李卉卉 杨云鹤 王双双
• 来源期刊: 色谱
• 学科: 化学
• 关键词: 毛细管电泳前沿分析 电喷雾质谱 相互作用 G-四链体 天然产物
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1069-1077
• 页数: 9页
• 分类号: O658
• 字数: 6411字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1123.2020.03001

摘要

药物与靶点间的作用关系直接影响到药理和药效.药物-靶点结合能力、结合计量关系等信息是药物研发过程中必需的表征数据.人类癌基因c-myb在结直肠癌等多种癌症组织中存在过度表达,目前已成为结直肠癌、白血病等癌症疾病潜在的治疗靶点.位于癌基因c-myb启动子区的一段富含鸟嘌呤(G)的DNA序列,通过阳离子的诱导可自发折叠形成分子内G-四链体,而小分子的特异性识别可以稳定该G-四链体,进而调节基因的转录和表达过程.该文采用压力辅助毛细管电泳前沿分析(PACE-FA)结合电喷雾质谱(ESI-MS)研究人类癌基因c-myb启动子G-四链体(G4)与天然产物分子间的相互作用.PACE-FA法在毛细管电泳前沿分析(CE-FA)过程中施加一个与分析物迁移同向的压力,在保证结果准确度的前提下,能够大大加快分析速度.同时结合ESI-MS,可快速解析结合分子与靶点的亲合力和化学计量关系.首先,利用ESI-MS快速筛选出3种有亲合力的天然产物,亲合力大小依次为:土荆皮乙酸>丁溴东莨菪碱>荷叶碱.考虑到溶液相中存在特异性与非特异性结合,接着用PACE-FA法准确分析溶液相中结合的特异性和结合常数.结果发现:丁溴东莨菪碱能够特异性结合靶点G4 DNA,结合比为1:1,结合常数为1.18×105 L/mol;荷叶碱属于非特异性结合,而土荆皮乙酸并未与靶点G4 DNA形成复合物.该组合方法不仅分析速度快,而且能够提高亲和分析的准确度和特异性,有望应用于靶向药物先导结构的发现和作用机制评价.