碱性成纤维细胞生长因子在富集结直肠癌肿瘤干细胞中的作用

• 作者: 侍琳 冯彦超 冷政伟 吴妮莎 周国俊 孙成杰 钟晓蓉 雷蕾 黄理政
• 来源期刊: 肝胆胰外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结直肠癌 悬浮培养 碱性成纤维细胞生长因子 肿瘤干细胞富集
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 169-174
• 页数: 6页
• 分类号: R73-3|R735
• 字数: 3799字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11952/j.issn.1007-1954.2020.03.009

摘要

目的 研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作用于结直肠癌细胞不同时间,富集肿瘤干细胞的效果.方法 结直肠癌DLD-1细胞分别在含5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL bFGF的无血清培养基中悬浮培养,分为G1、G2、G3组,设置培养时间梯度为10 d、20 d、30 d,获得球细胞.采用流式细胞术(FCM)检测细胞球中的CD44+、CD133+及CD44+CD133+双阳性的细胞表达比例,Real-time PCR检测球细胞中的干细胞基因(KLF4、Nanog);上皮间质转化基因(E-cadherin、Snail);Wnt/β-catenine通路基因(Wnt-3a)的mRNA表达情况,成球实验检测细胞球的自我更新能力.结果 FCM检测结果:CD44+阳性表达的细胞表达以G2组20 d最高,CD133+及CD44+CD133+双阳性的细胞表达均以G2组20 d及G3组10 d最高,差异有统计学意义(F=98.895、147.641、13.321,P<0.05).Real-time PCR检测结果:各组中KLF4、Nanog、Snail以及Wnt-3a mRNA的表达均以G2组20 d表达最高(F=2.424、7.694、2.951、3.771,均P<0.05),E-cadherin基因G2组20 d mRNA表达最低(G2组30 d、G1组10 d除外)(F=10.620,P<0.05).成球实验结果:各组比较G1组20 d和G2组20 d成球数量明显多于其他组,差异具有统计学意义(F=14.279,P<0.01);但G1组20 d和G2组20 d比较,无统计学差异(t=0.605,P=0.578).结论 碱性成纤维细胞生长因子无血清悬浮培养能够有效富集肿瘤干细胞,其中G2组培养20 d较其余组能更有效地富集结直肠癌肿瘤干细胞.