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5型腺病毒一步层析纯化方案研究
5型腺病毒一步层析纯化方案研究
作者:
张霖
王弘扬
胡利明
马羚
黄映辉
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
5型腺病毒(AdV5)
纯化
阴离子交换层析
超滤
摘要:
腺病毒(Adenovirus,AdV)是常见的基因治疗载体,已有的腺病毒下游纯化工艺通常采取阴离子交换层析搭配分子筛的方式,该方法存在耗时长、成本高、难以放大并且所获得的腺病毒中具有感染性的腺病毒比例较低的问题,本研究旨在探究并优化一步层析法,纯化得到高滴度的5型腺病毒.首先在5L生物反应器中利用HEK-293.2sus细胞扩增5型腺病毒,通过对细胞沉淀的反复冻融释放病毒,利用过滤和超滤技术去除部分杂质,并通过添加核酸酶降低料液的黏稠度,最后利用新型复合填料Capto core 700或Fractogel填料进行纯化.纯化后的病毒利用50%组织细胞感染量(Median tissue culture infective dose,TCID50)测定方法测定病毒滴度,利用PCR-荧光探针法检测宿主DNA的残留以及酶联免疫法检测宿主蛋白的残留以判断除杂效果.两种一步层析法纯化腺病毒的回收率均高于传统的两步法,但在宿主蛋白和宿主DNA的去除效果上Capto core700的结果均不如Fractogel填料与超滤置换的结合,所以利用超滤和Fractogel结合的纯化方式更适合获得临床级别的腺病毒.
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文献信息
篇名
5型腺病毒一步层析纯化方案研究
来源期刊
病毒学报
学科
医学
关键词
5型腺病毒(AdV5)
纯化
阴离子交换层析
超滤
年,卷(期)
2020,(1)
所属期刊栏目
人类病毒研究论著
研究方向
页码范围
77-83
页数
7页
分类号
R373.9
字数
语种
中文
DOI
10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003633
五维指标
作者信息
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5型腺病毒(AdV5)
纯化
阴离子交换层析
超滤
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研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
病毒学报
主办单位:
中国微生物学会
出版周期:
双月刊
ISSN:
1000-8721
CN:
11-1865/R
开本:
大16开
出版地:
北京西城区迎新街100号
邮发代号:
82-227
创刊时间:
1985
语种:
chi
出版文献量(篇)
2313
总下载数(次)
18
总被引数(次)
25071
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