南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5产α-淀粉酶Amy3809的表达、性质及其降解特性

• 作者: 李江 林学政 潘爱红 谷晓倩
• 来源期刊: 海洋科学进展
• 学科: 工学
• 关键词: α-淀粉酶 表达 酶学性质 酶解特性
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 81-90
• 页数: 10页
• 分类号: TQ925.1
• 字数: 7521字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6647.2020.01.009

摘要

对具有高淀粉酶活性的南极菌Pseudoalteromonas sp.A211-5的全基因组数据进行了分析和筛选,筛选获得α-淀粉酶疑似序列am y 3809,并采用基因工程手段对该基因的功能和性质进行验证和分析.首先,以淀粉酶Amy3809的完整开放阅读框(ORF)为模板设计特异引物,克隆获得amy3809的全序列并对其进行重组表达,获得的重组蛋白采用镍柱进行分离纯化;DNS-还原糖法测定重组酶的酶学性质;薄层层析(TLC)技术对Amy3809的酶解产物进行分析.实验结果:1)克隆获得的amy3809成功地连接到pET-30a载体,并在工程菌E.coli BL21(DE3)中实现了高效表达,纯化的重组酶Amy3809分子量为67 kDa;2)重组酶Amy3809在10～40℃的范围内仍能保持85％ 以上的酶活,但随着温度的升高酶活迅速降低,70℃时几乎失活,表明该酶具有良好的低温耐受特性及热敏感性;3)最适pH为7.0,在pH 5.0～10.0的范围内仍能保持50％ 以上的活性;4)金属离子Na+,K+和Ca2+均能提高Amy3809的活性,而Cu2+,Fe2+,Mg2+和EDTA则能显著降低Amy3809的活性;5)Amy3809的酶解产物主要为麦芽四糖、麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖.由此可知,南极菌产的α-淀粉酶Amy3809,具有良好的低温耐受特性,热敏感性和较广的pH耐受范围,并能够有效地将淀粉降解为低聚糖和葡萄糖,因而具有潜在的工业应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谷晓倩	自然资源部第一海洋研究所海洋生态环境科学与技术重点实验室	2	1	1.0	1.0
2	李江	自然资源部第一海洋研究所海洋生态环境科学与技术重点实验室	2	1	1.0	1.0
3	潘爱红	青岛科技大学化工学院	3	4	1.0	2.0
4	林学政	自然资源部第一海洋研究所海洋生态环境科学与技术重点实验室	1	0	0.0	0.0