胰岛素样生长因子结合蛋白4基因敲除小鼠的建立和鉴定

• 作者: 勾荣彬 孙晓红 张贺 徐群渊 段德义 王涵菲
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素样生长因子结合蛋白4 基因敲除小鼠 神经发育
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 161-167
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2020.02.0027

摘要

[目的]用CRISPR/Cas9技术构建胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)基因敲除(knock-out,KO)小鼠,以研究IGFBP-4对脑发育的影响.[方法]将IGFBP-4引导RNA和Cas9 mRNA显微注射于小鼠受精卵,繁育小鼠并观察体重和脑重改变.PCR和RT-PCR鉴定DNA和mRNA突变,Isotropic Fractionator测脑细胞总数和神经元数量,Western Blot观察NeuN表达,转棒实验测试动物行为学.[结果]KO造成了4种DNA缺失和插入突变,选择缺失GGGT致移码突变的动物进行繁育.与野生型小鼠相比,3月龄KO小鼠体重减轻了10.8％ (P ＜0.05),整脑、皮层和小脑重量分别减轻了7.2％、6.9％和10.3％ (P ＜0.05),小脑神经元比例和NeuN表达水平分别降低了14.3％和15.3％ (P ＜0.05),Rotarod运动能力有所降低.[结论]用CRISPR/Cas9成功制备了IGFBP-4 KO小鼠,动物体重和部分脑区重量和神经元数量受到了影响.