摘要:
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-486对小鼠酒精性脂肪肝病的影响.方法 同源的miR-486敲除小鼠(购自江苏集萃药康生物有限公司)杂合子交配得到子一代,选取8周龄子一代分为miR-486敲除对照组(KO-PAIR组)、miR-486敲除实验组(KO-ETOH组)、野生对照组(WT-PAIR组)和野生实验组(WT-ETOH组),每组8只.实验组小鼠喂食5% TP4030D酒精饲料,对照组喂食TP4030C对照饲料,每只小鼠每天喂食15 ml,喂养4周.实验最后1d上午酒精组联合1次酒精(31.5%)灌胃,对照组用糊精灌胃,每只100μ1.9h后处死小鼠收集其肝组织和血清.肝组织切片行苏木精-伊红(HE)和饱和油红O染色;检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法(Westernblot)检测脂质代谢相关分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的mRNA和蛋白水平;评估酒精性脂肪肝病的严重程度,并探讨机制.多样本间比较采用单因素方差分析,组间比较采用t检验分析.结果 HE染色和饱和油红O染色显示,WT-ETOH组肝脏脂肪变最严重,KO-ETOH组脂肪变明显改善.与WT-ETOH组比较,KO-ETOH组的血清ALT、AST和TNF-α均明显降低[(124.875 ±38.591) U/L比(45.500±20.333) U/L,(190.750±23.789)U/L比(140.625±31.794) U/L,(73.407±17.121) μg/L比(50.056±12.717) μg/L,F=32.503、5.876、30.865,P<0.05],差异有统计学意义;与WT-ETOH组比较,KO-ETOH组AMPK的mRNA水平较高(0.61±0.09比1.06±0.11,F=21.249,P<0.01),差异有统计学意义,而ACC的mRNA水平较低(1.98±0.23比1.23±0.12,F=68.584,P<0.01),差异有统计学意义;Western blot实验检测进一步验证了这一结果.结论 miR-486敲除可以减轻小鼠酒精性脂肪肝病,其机制可能是通过调节脂质代谢来实现的.