重组人基质金属蛋白酶12的原核表达与纯化

• 作者: 侯江厚 史阅韩 孙卫国 孙雯娜 张灵霞 翟斐
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 基质金属蛋白酶12 原核表达 肠激酶 纯化
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 56-60
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3408字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.01.011

摘要

目的:利用原核系统表达重组对人基质金属蛋白酶12(MMP-12)并纯化,获得高纯度的人MMP-12蛋白.方法:在MMP-12氨基酸序列的N端加入His标签和肠激酶位点序列,构建MMP-12融合蛋白的原核表达载体,通过表达和亲和纯化获得MMP-12融合蛋白,以肠激酶对融合蛋白进行酶切和二次纯化,获得高纯度的人MMP-12.结果:构建了pET-MMP-12表达载体,并在大肠杆菌中实现了稳定高效表达.重组融合蛋白MMP-12经亲和层析纯化后,相对分子质量为42×103,纯度约95％.利用肠激酶对融合蛋白MMP-12进行酶切,酶切效率接近100％,通过二次纯化获得了MMP-12,相对分子质量为40.8×103,纯度大于95％.结论:利用原核表达系统高效表达了MMP-12融合蛋白,通过亲和纯化和肠激酶酶切的方法可以获得高纯度的MMP-12,为后续抗体制备和配基筛选奠定了基础.