四环素诱导的YAP1敲减系统的建立及其对胃癌细胞功能的影响

• 作者: 丁晓琛 乔一桓 刘俊 姜勋亮 李纪鹏 王贺 闫静川 黄硕
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 四环素诱导表达系统 shRNA 胃癌 YAP1基因 增殖 迁移
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 690-695
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb202005011

摘要

目的 建立一种四环素(tetracycline,DOX)诱导的基因敲减系统,并利用此系统研究YAP1对胃癌细胞功能的影响.方法 构建pLKO.1-tetON-YAP1敲减的慢病毒载体,酶切和测序方法检测载体构建成功与否;慢病毒感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,建立DOX诱导的YAP1敲减的胃癌细胞系;RT-PCR检测YAP1 mRNA相对表达量,Western blotting检测YAP1蛋白水平变化;平板克隆实验检测细胞增殖情况;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移的情况.结果 构建四环素诱导的YAP1敲减的病毒质粒,酶切鉴定结果显示,在6000 bp和3000 bp处各有一条带,测序结果与设计的shRNA序列一致.包装慢病毒并感染胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28,DOX诱导组中,感染pLKO.1-tetON-YAP1的病毒的细胞中YAP1 mRNA的相对表达量和蛋白水平明显下调;而未诱导组则无明显变化.平板克隆形成实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组克隆形成数明显降低;未诱导组无明显变化.划痕实验和Transwell迁移实验结果显示,DOX诱导后shYAP1组表达后细胞迁移能力受到抑制,未诱导组无明显变化.结论 成功建立了四环素诱导的慢病毒系统,利用此系统敲减胃癌细胞YAP1基因,胃癌细胞增殖和迁移能力受到抑制.