人IER5基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

• 作者: 丁库克 丁立新 刘晓丹 周平坤 姜晓燕 熊强
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 生物学
• 关键词: IER5 Sf9细胞 杆状病毒表达系统 鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 57-61,66
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 字数: 4027字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2020.01.011

摘要

目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达早期快速反应基因5(IER5)蛋白,为后续蛋白质结晶及探索蛋白质三级结构提供线索.方法:以HeLa细胞cDNA为模板扩增出IER5基因片段,构建重组转移质粒pFastBac1-IER5;重组转移质粒经双酶切及测序鉴定后转化至感受态细胞DH10Bac,以获得重组的穿梭质粒rBacmid-IER5;将重组穿梭质粒感染Sf9细胞,待细胞出现明显病变时收集重组杆状病毒;用间接免疫荧光、SDS-PAGE及Western blot以及对表达产物进行分析鉴定.结果:重组转移质粒pFastBac1-IER5经双酶切后得到与预期相同的2条条带;重组穿梭质粒rBacmid-IER5经PCR鉴定在3300 bp左右出现一条特异性条带;间接免疫荧光结果提示IER5蛋白在Sf9细胞中得到表达;SDS-PAGE结果显示,表达产物的相对分子质量约为48 k,Western blot结果表明表达产物能与IER5抗体特异性结合.结论:利用昆虫-杆状病毒表达系统成功表达了人IER5蛋白,获得了体外表达重组IER5蛋白的相对分子质量、溶解性等物理化学特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周平坤	军事医学科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室	108	511	11.0	16.0
2	刘晓丹	军事医学科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京市放射生物学重点实验室	32	118	5.0	10.0
3	姜晓燕	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	34	72	5.0	7.0
4	熊强	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	2	0	0.0	0.0
5	丁立新	中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所	6	4	2.0	2.0