贵州油茶软腐病病原检测

• 作者: 刘文霞 张柱亭 秦绍钊
• 来源期刊: 山东农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 油茶 软腐病 病原检测
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 页码范围: 420-425
• 页数: 6页
• 分类号: S794.4
• 字数: 4540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2324.2020.03.006

摘要

贵州是我国主要油茶种植省份之一,油茶种植爆发病虫害导致产量与质量急剧下降,其中软腐病最为显著.本文以油茶软腐病中的粉芽孢杆菌为例,结合实时荧光PCR和巢式PCR技术,检测油茶软腐病病原菌.荧光PCR检测过程为:设计反应程序与标准曲线,确定引物浓度、Mg2+浓度,将油茶软腐病病原菌DNA作模板,通过特异性引物对L1/L2实现PCR扩增;在克隆质粒和病原菌XJ8-3-3悬液两种模板中,对比实时荧光PCR和普通PCR的灵敏度;向健康植株叶片注射软腐病粉芽孢杆菌悬液,培养5d后,采集患病油茶植株根部、球茎等部位检测软腐病病原菌含量.巢式PCR检测病原菌过程为:菌株活化放置PDA平板培养两天并采集病原菌丝;根据油茶软腐病的ITS序列和GenBank中,近似种的ITS序列差异设计B1与B2两种特异性引物,经过预变性、变性等步骤完成扩增,扩增产物用于凝胶检测.检测结果如下:(1)两种模板环境下,实时荧光PCR检测灵敏度优于普通PCR技术100倍,叶柄组织的根部软腐病病原菌含量最少;(2)引物B1与B2检测油茶软腐病病菌得到405 bp左右的条带扩增产物,测序结果显示发病菌株的碱基序列和粉芽孢杆菌序列吻合.结果显示,两种PCR技术均可检测油茶软腐病病原中的粉芽孢杆菌,为防治油茶软腐病提供科学依据.