三七根中茄腐镰刀菌的实时荧光定量PCR检测

• 作者: 刘迪秋 孙恬 崔秀明 李欣 郭爱玲 陈军
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 三七根腐病 茄腐镰刀菌 分子诊断 qRT-PCR 实时荧光环介导等温扩增
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1302-1307
• 页数: 6页
• 分类号: R282.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2020.05.029

摘要

目的 建立一种准确、快速地检测三七Panax notoginseng根腐病病原真菌茄腐镰刀菌Fusarium solani的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法.方法 基于茄腐镰刀菌的氨基己二酸还原酶(Lys2)基因设计了qRT-PCR的特异性引物对Fs-QF和Fs-QR,制备了该基因的重组质粒标准品,建立了茄腐镰刀菌的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法和实时荧光环介导恒温扩增技术(LAMP)体系.从三七种植区采集到15个具有根腐病、黑斑病典型症状的三七病株及三七种植土壤样品,并提取了这些样品的总DNA,运用建立的检测方法进行检测.结果 建立的qRT-PCR检测方法和实时荧光环介导恒温扩增技术特异性强,能快速检测到携带茄腐镰刀菌的三七根腐病病株.此外,该方法灵敏度高,检测模板质量浓度可低至0.2 pg/μL.结论 建立的方法能明确三七种植土壤以及三七病株中茄腐镰刀菌数量的动态变化.可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及为带病三七种子、种苗的快速分子检测提供技术支持.