BHK-21细胞无血清悬浮培养生产新城疫病毒

• 作者: 刘志亮 刘旭平 叶倩 周燕 姬阿美 白春丽 谭文松
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: NDV BHK-21细胞 无血清 悬浮培养 增殖条件
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 114-121
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201907014

摘要

为建立基于无血清悬浮培养细胞生产新城疫病毒(NDV)的工艺,本研究首先筛选了适于NDV增殖的乳仓鼠肾细胞(BHK-21)单克隆细胞株,并将鸡胚适应的NDV在筛选获得的细胞株(BHK-v002)中传代,获得细胞适应的NDV.进一步采用单因素实验法检测病毒感染复数(MOI)、TPCK-胰酶浓度、细胞培养液的稀释比例等工艺参数对病毒效价的影响.结果 显示,NDV在无血清培养的BHK-v002细胞中增殖的最适条件为:当细胞生长至约9.0×106个/mL时,以培养液∶新鲜培养基为2∶1的比例补加新鲜培养基,使细胞密度达6.0×106个/mL,按MOI为0.005接种NDV LaSota株,TPCK-胰酶终浓度为5 μg/mL.接种病毒后96 h收获病毒液的HA效价为8.5 log2HAU/25 μL,单细胞产毒量(Svy)达到1 685.9病毒颗粒/细胞,半数组织细胞感染剂量(TCID50)为7.9 log10TCIDM100 μL.本研究确定了NDV LaSota株在BHK-21细胞悬浮培养中的增殖条件,建立了基于BHK-21细胞无血清悬浮培养体系中NDV的生产工艺,该工艺操作简便,易于放大,为当前ND疫苗的鸡胚生产工艺提供了候选替代方案.