巴马小型猪组织qRT-PCR内参基因的筛选

• 作者: 刘璐璐 张垒霞 李华 李奎 杨亚岚 裴杨莉 陈楚杰
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: qRT-PCR 基因表达 内参基因 巴马小型猪
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 158-166
• 页数: 9页
• 分类号: S828
• 字数: 5557字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.06.016

摘要

qRT-PCR是检测细胞、组织基因表达的重要方法之一.而选择合适的内参基因是准确计算目标基因表达水平并进行基因功能研究的关键.本研究使用qRT-PCR技术检测了9个候选基因:拓扑异构酶-2β基因(topoisomerase(DNA)Ⅱβ,Top2b)、β-肌动蛋白基因(β-actin,Actb)、核糖体蛋白S18基因(ribosomal protein S18,Rps18)、肽基脯氨酰异构酶A基因(peptidylprolyl isomerase A,Ppia)、18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA,18S)、TATA盒结合蛋白基因(TATA-box binding protein,Tbp)、羟甲基胆素合成酶基因(hydroxymethylbilane synthase,Hmbs)、核糖体蛋白L4基因(ribosomal protein L4,Rpl4)和β-2-微球蛋白基因(β-2-microglobulin,B2m),在15日龄巴马小型猪(Sus scrofa)的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和皮下脂肪7个组织上的表达情况,并通过geNorm、NormFinder和BestKeeper程序对结果进行分析.基因表达稳定性结果表明,Rps18、Rpl4、Ppia和Tbp在所有组织中稳定性最高.而单个组织内只需使用两个内参基因即可标准化目标基因的表达,且不同组织的最优内参基因组合不同.本结果为选择巴马小型猪内参基因提供参考,进而为巴马小型猪的肉质、产仔数、发育、繁殖和疾病等相关基因的功能研究提供理论基础.