直接PCR法在口腔牙龈卟啉单胞菌检测中的应用

• 作者: 谷变利 王娟萍 孔金玉 刘雅莉 张灏 詹启敏 高社干
• 来源期刊: 食管疾病
• 关键词: 食管癌 牙龈卟啉单胞菌 直接PCR 分子流行病学
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 38-42
• 页数: 5页
• 分类号: R-331
• 语种: 中文
• DOI: 10.15926/j.cnki.issn2096-7381.2020.01.008

摘要

目的 为了便于食管癌大规模流行病学筛查工作的开展,探讨一种能快速敏感地检测口腔牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)DNA的免核酸抽提直接PCR方法.方法 收集我院门诊100例体检人员的200份口腔拭子(每人双份),以TE buffer(10 mM Tris,0.1 mM EDTA,pH 8.0)、商品化裂解液以及核酸抽提试剂盒等作为基因组提取试剂,使用P.gingivalis特异引物探针进行直接定量PCR检测.结果 与裂解液-直接qPCR法相比,TE-直接qPCR法的灵敏度为94.12％,特异性为100％;与试剂盒-qPCR法相比,TE-直接qPCR法的灵敏度与特异性均为100％;TE-直接qPCR法与裂解液-直接qPCR法以及与试剂盒-qPCR法检测P.gingivalis均具有高度一致性(分别为Kappa=0.954,Kappa=1);TE-直接qPCR法与试剂盒-qPCR法检测阳性P.gingivalis的Ct均值无显著差异(P=0.907).结论 TE-直接qPCR法检测口腔P.gingivalis灵敏度高、特异性强,是快速高效检测口腔P.gingivalis的理想方法,可用于食管癌大规模分子流行病学研究.