猪链球菌蛋白表面展示系统的构建及展示蛋白的初步观察

• 作者: 刘冉 刘思国 卫东 张跃灵 朱金鲁 李刚 谢芳 陈平 黄萌萌
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌 蛋白表面展示 LPxTG 信号肽 胞壁锚定基序
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 105-113
• 页数: 9页
• 分类号: S852.4
• 字数: 4615字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201907004

摘要

为构建猪链球菌(Streptococcus suis)蛋白表面展示系统,本研究通过序列分析,确定猪链球菌的LPxTG蛋白及其信号肽(SP)和胞壁锚定基序(CWA),通过PCR扩增Peno-SP、GFP、CWA的DNA片段并融合,构建强启动子Peno控制表达编码SP-GFP-CWA融合蛋白的DNA片段,将该重组DNA片段连接pSET2载体,获得蛋白表面展示质粒,转化猪链球菌,构建得到以GFP为报告蛋白的猪链球菌蛋白表面展示系统.结果 显示,利用猪链球菌的10个LPxTG蛋白及其SP和CWA序列,构建了10个含有Peno-SP-GFP-CWA融合片段的重组pSET2表面蛋白展示质粒pSsPSD1至pSsPSD10,分别转化猪链球菌05ZYH33,PCR鉴定显示其中7个转化猪链球菌.采用western blot初步检测其展示蛋白,结果显示,7个转化阳性菌株均能有效表达GFP蛋白,以成熟GFP条带为指标,均表现出了一定的外源GFP表面展示水平,分别命名为SsPSD1、SsPSD2、SsPSD4、SsPSD7-SsPSD10,其中SsPSD1、SsPSD4、SsPSD8和SsPSD9表面展示水平相对较好,在猪链球菌表面展示外源蛋白方面具有很好的潜力.本研究首次尝试建立猪链球菌蛋白表面展示系统,为猪链球菌表面递呈外源蛋白或抗原提供了新的策略.