斑石鲷TGF-β1基因克隆和表达分析

• 作者: 徐文腾 李明 王杉 王洁 王磊 翟介明 陈松林
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 斑石鲷 虹彩病毒 TGF-β1
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 78-87
• 页数: 10页
• 分类号: S942.1
• 字数: 7746字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20190309001

摘要

虹彩病毒是造成斑石鲷(Oplegnathus punctatus)工厂化养殖中大规模死亡的主要病原,其感染力极强,感染后的斑石鲷死亡率高,严重影响了斑石鲷养殖产业发展.转化生长因子TGF-β1是一种重要的免疫调节因子,在病毒免疫应答中发挥重要作用.为研究TGF-β1在斑石鲷被虹彩病毒感染过程中发挥的作用,运用RACE和实时荧光定量qRT-PCR技术对TGF-β1进行了基因克隆,并对其进行在不同组织、不同时间点相对表达量的差异分析.结果 显示,斑石鲷TGF-β1基因cDNA序列全长为3157 bp,5'非编码区长712 bp,3'非编码区长1278 bp,开放性阅读框长1167 bp,编码388个氨基酸,基因组包含6个外显子和5个内含子.同源分析发现,TGF-β1和鱼类相似度较高,与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)的同源性最高,为76.67％.TGF-β1在斑石鲷健康组织(肝脏、脾脏、肾脏、头肾、心脏、鳃、胃、肠和皮肤)中均有表达,在头肾、肠、肝脏和皮肤组织中表达量较高,而在脾脏和肾脏组织表达量较低.为进一步研究TGF-β1在病毒感染过程中相对表达量的变化,对健康斑石鲷注射虹彩病毒进行刺激,随后比较了TGF-β1在脾脏、肝脏、肾脏、头肾4个不同组织、不同时间点的相对表达量的差异,在头肾、脾脏和肝脏中,病毒刺激后TGF-β1的表达量均出现升高,但在脾脏和肝脏中,峰值出现在刺激后第4天,而在头肾中峰值出现在感染后的第10天.在肾脏中,病毒刺激后的TGF-β1的表达呈现下降趋势,0d表达量最高,4、7d依次降低,7d降至最低,10d有所恢复.以上研究表明,TGF-β1可能响应了虹彩病毒对机体的刺激,可能在对病毒免疫应答中发挥作用.而病毒感染后不同组织中TGF-β1相对表达量的差异,则值得进一步研究.