人TSHRA亚单位重组腺相关病毒体内外表达研究

• 作者: 丁习 伍丽萍 德吉措穆 施秉银 王静雅 谢宝松 赵凤仪 赵媛 赵洋 高楚淇
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 促甲状腺素受体A亚单位 重组腺相关病毒 蛋白表达 格雷夫斯病
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 678-682
• 页数: 5页
• 分类号: R581.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb202005009

摘要

目的 探讨人TSHR A亚单位重组腺相关病毒(rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen)能否在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠体内表达及其表达效率.方法 以rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染NIH3T3,Western blotting检测目的基因蛋白表达;分别以不同剂量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen注射雌性BALB/c小鼠,免疫荧光法检测TSHR A亚单位蛋白在各个器官的表达,免疫放射法测定血清TSHR抗体(TRAb)滴度.结果 感染rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreenNIH3T3细胞48 h及72 h后均有目的蛋白表达,与24 h相比较明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜下可见腿部骨骼肌、心肌、肝脏、脾脏有不同程度的TSHR289表达;放免法测定结果显示,注射剂量越大,血清TRAb抗体滴度越高,但只有高剂量和对照组之间有统计学差异(P<0.05).中剂量和高剂量肌内注射在第4、8、12周小鼠体内均有抗体反应,但以第4周最强,4～8周逐渐减弱,抗体持续时间可达12周.结论 rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen可在体外及小鼠体内高效表达,并具有较强免疫原性,可能成为制备Graves病模型的一种重要手段.