CDK1磷酸化修饰对驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性的影响

• 作者: 周之春 朱长军 苏春玉
• 来源期刊: 天津师范大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CDK1 磷酸化修饰 驱动蛋白 Kif18A 杆状病毒 ATP酶活性
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 12-17
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 字数: 4186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19638/j.issn1671-1114.20200303

摘要

为了探究真核细胞中蛋白激酶CDK1的磷酸化修饰对驱动蛋白分子Kif18A的ATP酶活性的影响,利用昆虫杆状病毒表达系统,在体外表达并纯化Kif18A模拟磷酸化(EE)和非磷酸化(AA)的突变体蛋白(Kif18A-EE,Kif18A-AA).首先构建驱动蛋白Kif18A的杆状病毒表达载体质粒pFast-Bac-FLAG-Kif18A-AA或EE,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选得到阳性克隆.随后提取杆状病毒基因组,转染昆虫细胞SF9后得到能够表达FLAG-Kif18A突变体蛋白的杆状病毒.扩增病毒后,对病毒感染SF9细胞表达目的蛋白的条件进行优化,最终通过蛋白纯化得到有活性的Kif18A突变体蛋白,并在体外检测纯化蛋白的ATP酶活性.结果显示,Kif18A-EE蛋白的ATP酶活性低于Kif18A-AA蛋白.这一结果表明,CDK1的磷酸化修饰能够降低驱动蛋白Kif18A的ATP酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱长军	天津师范大学生命科学学院	20	23	3.0	3.0
10	苏春玉	天津师范大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
19	周之春	天津师范大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0