NVP-TNKS656通过调节Hippo信号通路抑制肝细胞肝癌的生长

• 作者: 乔昱 于刚 张子瑾 张帅 李琳 段蓓蓓 胡哲慧 赵赟博
• 来源期刊: 中华老年医学杂志
• 关键词: 肝细胞肝癌 NVP-TNKS656 信号通路
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 700-705
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-9026.2020.06.021

摘要

目的 研究NVP-TNKS656对肝细胞癌(HCC)细胞系生长的影响以及相应分子机制.方法 采用2.5、5、10.0 μmol/L剂量NVP-TNKS656处理5种HCC细胞系,选取HLE及HLF细胞系,分为四组:二甲基亚砜(DMSO)组、NVP-TNKS656 2.5.0 μmol/L组、NVP-TNKS656 5.0μmol/L组和NVP-TNKS656 10 μmol/L组,细胞培养48 h进行后续实验.采用结晶紫染色法计数细胞克隆形成数目;蛋白质印迹法检测是相关蛋白(YAP)、血管动蛋白样1(AMOTL1)、血管动蛋白样2(AMOTL2)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测YAP及其下游结缔组织生长因子(CTGF)和富含半胱氨酸的血管生成诱导剂61(Cyr61)的mRNA表达;采用双荧光素酶报告基因检测转录增强因子域家族(TEAD)荧光素酶活性. 结果 在HLE、HLF、Huh7、MHCC97-H、MHCC97-L细胞系中,NVP-TNKS656以剂量依赖的方式抑制了5种HCC细胞系的生长,DMSO对照组与不同剂量给药组间细胞克隆形成计数均差异有统计学意义(F=90.46、68.58、191.8、114.6、201.4,均P＜0.05).在HLE和HLF细胞系中,NVP-TNKS656可呈剂量依赖性显著降低YAP蛋白水平,降低YAP下游靶基因CTGF(HLE细胞分别为1.02±0.02、0.90±0.03、0.57±0.02、0.38±0.03,HLF细胞分别为0.98±0.03、0.86±0.02、0.66±0.02、0.43±0.01)及Cyr61(HLE细胞分别为1.00±0.01、0.86±0.02、0.74±0.03、0.44±0.03,HLF细胞分别为0.99±0.02、0.87±0.01、0.72±0.02、0.54±0.01)的表达(均P＜0.05),并抑制YAP/TEAD荧光素酶分子的活性.同时NVP-TNKS656以剂量依赖的方式上调了YAP的两个主要负调控因子,即AMOTL1/2蛋白,促进HLE和HLF细胞的凋亡. 结论 NVP-TNKS656可以通过稳定AMOTL1/2下调YAP下游靶基因从而抑制HCC的增殖,可能成为治疗HCC的潜在药物.