滑液支原体NADH氧化酶的酶学活性及亚细胞定位研究

• 作者: 于圣青 尚原冰 李浩然 王宇 王桂军 祁晶晶
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 滑液支原体 NADH氧化酶 酶学活性 免疫原性 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 兽医微生物学
• 页码范围: 801-812
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.190649

摘要

[背景]许多研究表明,支原体的NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)不仅在胞浆中发挥生物酶学功能,也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能.[目的]对滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究,分析其在MS致病过程中的潜在作用.[方法]对MS的NOX蛋白进行原核表达、纯化,然后对重组MSNOX (rMSNOX)的酶学活性及影响酶活的条件进行研究,测定其酶比活力、米氏常数及最大反应速率,接着用MS阳性血清及制备的rMSNOX兔多克隆抗体,分别与rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞浆蛋白进行Western blotting 反应,鉴定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情况.[结果]在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达rMSNOX蛋白,相对分子质量约为53kD,并获得纯化的rMSNOX蛋白;酶活测定显示rMSNOX蛋白的酶比活力为14.17 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5,双倒数法求得rMSNOX的最大反应速率Vmax为21.8 μmol/(L·min),米氏常数Km(NADH)为244.0 μmol/L;rMSNOX蛋白与MS阳性血清特异性结合,证明具有良好的免疫原性;亚细胞定位研究表明NOX蛋白主要存在于MS的胞浆中,细胞膜上有少量的分布.[结论]首次证实MS的NOX不仅具有NADH氧化酶活性,也是MS具有免疫原性的膜蛋白,为进一步探索NOX在MS致病过程中的作用提供了分子基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王桂军	安徽农业大学动物科技学院	97	648	13.0	20.0
2	于圣青	中国农业科学院上海兽医研究所	53	286	9.0	14.0
3	王宇	中国农业科学院上海兽医研究所	48	372	10.0	18.0
4	李浩然	安徽农业大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0
8	祁晶晶	中国农业科学院上海兽医研究所	4	5	2.0	2.0
9	尚原冰	锦州医科大学畜牧兽医学院	1	0	0.0	0.0