双酚A对大鼠胰岛素瘤细胞凋亡及胰岛素分泌水平的影响

• 作者: 张亚娟 德小明 朱丽敏 李丽萍 李玲 王乐
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 双酚A INS-1细胞 细胞凋亡 Bcl-2 Bax caspase3 cleaved-caspase3
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 609-615
• 页数: 7页
• 分类号: R123
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2020.19793

摘要

[背景]双酚A (BPA)是一种典型的具有拟雌激素作用的环境内分泌干扰物.越来越多的研究显示,BPA暴露与人类2型糖尿病(T2DM)发生呈正相关,但其作用机制尚不清楚.探讨BPA对糖代谢的影响具有非常重要的意义.[目的]探讨双酚A对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)凋亡及胰岛素分泌水平的影响.[方法]常规培养INS-1细胞,待细胞贴壁后,用含不同浓度BPA(6、30、150 μmol·L-1)的RPMI1640培养基进行染毒,以DMSO为溶剂(终浓度≤0.1％).采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTr)检测BPA对INS-1细胞存活率的影响;流式细胞术检测BPA对INS-1细胞凋亡率的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测BPA染毒对INS-1细胞ROS水平的影响;葡萄糖刺激胰岛素分泌实验检测不同浓度BPA对INS-1细胞胰岛素分泌的影响;荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法分别检测BPA对INS-1细胞Bcl-2、Bax、半胱天冬酶(caspase)3基因及其蛋白表达水平的影响.[结果]与DMSO溶剂对照组比较,30 μmol·L-1 BPA组INS-1细胞存活率增高,150 μmol·L-1 BPA组细胞存活率降低(P＜0.01).流式细胞术检测结果显示:6、150 μmol·L-1 BPA组INS-1细胞总凋亡率增高(均P＜0.05).6、30、150 μmol·L-1 BPA组INS-1细胞内ROS含量增加(均P＜0.05).葡萄糖刺激胰岛素分泌实验结果显示:在基础浓度葡萄糖(5.6 mmol·L-1)刺激下,6、30 μmol·L--1 BPA组INS-1细胞胰岛素分泌水平增高(均P＜0.05), 150 μmol·L-1 BPA组胰岛素分泌水平下降(P＜0.01),而在高浓度葡萄糖(16.7 mmol·L-1)刺激下,30 μmol·L-1 BPA组胰岛素分泌水平增高(P＜0.05),6、150 μmol·L-1 BPA组胰岛素分泌水平下降(均P＜0.05).抑制凋亡基因Bcl-2的mRNA及蛋白相对表达水平在6、150 μmol·L-1 BPA组降低,在30 μmol·L-1 BPA组增高(均P＜0.05);促进凋亡基因Bax的mRNA和蛋白相对表达水平在150 μmol·L-1 BPA组增高(均P＜0.05);caspase3的mRNA和蛋白相对表达水平在150 μmol.L-1BPA组增高,在30 μmol·L1BPA组降低(均P＜0.05);Bcl-2与Bax的mRNA和蛋白相对表达比值在6、150 pmol·L-1 BPA组降低(均P＜0.05);cleaved-caspase3与caspase3蛋白相对表达水平比值在6、150 μmol·L-1 BPA组增高(均P＜ 0.05).[结论]30 μmol·L-1BPA对INS-1细胞具有一定的促进增殖作用,对INS-1细胞胰岛素分泌水平也具有促进作用;6、150 μmol·L-1BPA可降低INS-1细胞活力,诱导INS-1细胞凋亡,降低胰岛素分泌水平,其作用机制可能与氧化损伤有关.