沉默c-fos基因 对PM2.5染毒人支 气管上皮细胞癌基因和凋亡相关基因表达的影响

• 作者: 余淑苑 刘宁 季佳佳 张朝晖 徐新云 李柏茹 秦双建 蔡颖 郑凯
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: c-fos 大气细颗粒物 人支气管上皮细胞 基因沉默 癌基因 凋亡相关基因
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 298-303,308
• 页数: 7页
• 分类号: R122.7
• 字数: 5444字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2020.04.009

摘要

目的:探讨沉默c-fos基因对PM2.5染毒人支气管上皮细胞(HBE细胞)癌基因和凋亡相关基因表达的影响.方法:采用RNA干扰技术,根据GenBank提供的c-fos mRNA序列,设计合成shRNA干扰序列,将重组慢病毒载体转染HBE细胞,构建c-fos基因沉默细胞株.采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot对c-fos基因沉默效果进行鉴定.以HBE细胞、c-fos基因沉默细胞为实验对象,用浓度为50μg/mL的PM2.5混悬液染毒24 h,同时设立阴性对照组,qPCR和Western blot分别检测部分癌基因c-myc、k-ras、c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8在mRNA及蛋白质表达水平的变化.结果:转染c-fos-shRNA慢病毒的HBE细胞中,经qPCR和Western blot检测发现,与对照组HBE细胞相比,c-fos mRNA表达水平下降70.1％,c-fos蛋白表达水平下降53.7％.PM2.5染毒HBE细胞后,与未染毒的对照组比较,c-myc和k-ras mRNA表达水平分别升高30.46％、27.17％,差异均有统计学意义(P<0.05),c-fos、Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别升高50.78％、71.91％、74.16％,p53 mRNA表达水平下降12.27％,差异均有统计学意义(P<0.01).PM2.5染毒c-fos基因沉默细胞后,与未染毒组比较,c-myc、k-ras mRNA表达水平分别下降13.08％、5.39％,Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达水平分别下降25.03％、21.37％(P<0.05),p53 mRNA下降53.39％(P<0.01).此外,c-fos基因沉默细胞染毒后,与HBE正常细胞染毒后比较,c-myc、k-ras、p53、c-fos、Caspase-3和Caspase-8的mRNA表达水平均有所下降(P<0.05);仅c-myc蛋白表达下降(P<0.01).结论:成功构建c-fos基因沉默细胞株;PM2.5可引起HBE细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平明显升高,c-fos基因沉默在一定程度上能抑制PM2.5对癌基因和凋亡相关基因的激活作用.