定点突变对低温脂肪酶活性和热稳定性的影响

• 作者: 于凡 亢春雨 张先舟 檀建新 王红静 陈海清 马雯
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 脂肪酶 定点突变 重叠延伸PCR PoPMuSiC 酶活力
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 页码范围: 96-102
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0036

摘要

使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1对粘质沙雷氏菌菌株L1的脂肪酶(lipA)每个氨基酸突变后的去折叠自由能变化(ΔΔG)进行预测、筛选,用重叠延伸PCR法构建了2个脂肪酶突变体lipA-Asn86Glu、lipA-Asn132Lys.经大肠杆菌表达和酶蛋白纯化后,对其酶学特性进行了表征.2个突变体和野生型的脂肪酶最适温度为30℃、最适pH值为8.与野生型相比,lipA-Asn86Glu的比酶活提高了8％,lipA-Asn132Lys的比酶活比野生型降低了19％;lipA-Asn86Glu在50℃下酶的半衰期与野生型相似,Km和Kcat值有所下降,而lipA-Asn132Lys的50℃时半衰期、Km和Kcat都明显降低.上述结果为通过理性设计突变位点对酶进行分子改造,以提高酶活力或热稳定性,提供了借鉴和途径.