人体肝脏靶向性新型AAV血清型载体的研发

• 作者: 吴侠 宁秦洁 杜增民 肖啸 胡泽岚 郑静 闫梦迪 陈颖
• 来源期刊: 华东理工大学学报（自然科学版）
• 关键词: 腺相关病毒(AAV) 基因治疗 新型AAV血清型 DNA shuffling 靶向 肝脏细胞
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 应用化学
• 页码范围: 404-410
• 页数: 7页
• 字数: 3965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14135/j.cnki.1006-3080.20190312002

摘要

通过DNA shuffling技术选择8种AAV (AAV1～AAV4,AAV6～AAV9) cap基因序列进行cap基因的DNA改组,获得AAV突变体基因库.将突变体基因库插入到含有AAV2Rep基因和ITR序列的质粒中,最终获得了大于107的独立克隆(具有全套AAV基因组序列).通过转化实验获得随机感染质粒文库(pIRC).将所得质粒经过共转染HEK293细胞,72 h后收集纯化病毒,获得感染性AAV文库.利用野生型5型腺病毒(Wild Type Ad5,wt Ad5)辅助感染人肝癌Hep G2细胞,进行筛选后,最终在肝细胞中富集获得1种新型AAV血清载体AAVXL12.通过将携带GFP基因的不同AAV血清型载体感染Hep G2细胞,观察到不同程度的绿色荧光的表达,最终显示筛选到的AAV血清型载体AAVXL12介导的GFP基因表达效果最好,荧光强度最强.