斑马鱼ftr56基因克隆表达及功能研究

• 作者: 刘学芹 刘皖蒙 姚健 邝鸣 霍诗天
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: FTR56 克隆表达 SVCV 抗病毒 斑马鱼
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 20-25
• 页数: 6页
• 分类号: Q344+.1
• 字数: 4746字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2020.003

摘要

为进一步了解硬骨鱼类特有的finTRIM (Fish novel tripartite motif,ftr)在斑马鱼(Danio rerio)抗病毒天然免疫中的作用,研究克隆了斑马鱼ftr56基因并分析了其对鲤春病毒血症病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)增殖的抑制作用.根据NCBI中斑马鱼ftr6序列设计引物,采用PCR方法,扩增ftr56 CDS区,连接至真核表达载体pcDNA4.0-His,构建真核表达质粒pcDNA4.0-ftr56-His,进行生物信息学分析.采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术检测SVCV感染斑马鱼胚胎成纤维细胞(ZF4)后ftr56 mRNA的变化.系统进化树分析显示,斑马鱼FTR56单独聚为一支.氨基酸多序列比对结果显示,其与黑猩猩、牛、鼠的TRIM56相似度为22％-23％.FTR56二级结构具有1个RING指结构域,1个B-box结构域,1个卷曲螺旋结构域和1个B30.0结构域.qRT-PCR检测结果显示,ftr56在SVCV感染后24h表达量显著上升.在过表达ftr56后,SVCV的G蛋白mRNA水平和蛋白水平在12h和24h相比对照组明显减少,培养基上清中SVCV滴度也明显降低,表明FTR56抑制SVCV的增殖.实验为进一步揭示finTRIM在鱼类病毒性疾病中的免疫调节机制提供参考.