通过两步离子交换层析建立保留HLA-A2二聚体构象的纯化方法

• 作者: 吴雄文 杨敬 梁智辉 翁秀芳
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 两步离子交换层析 HLA-A2二聚体 纯化方法 空间构象
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 301-306,311
• 页数: 7页
• 分类号: R34-33
• 字数: 6229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2020.03.010

摘要

目的 建立两步离子交换层析纯化方法以获得浓缩的高纯度HLA-A2二聚体.方法 收集转染有HLA-A2-IgG1 Fc重组基因的7A2D细胞上清,并进行ELISA和Western blot鉴定7A2D细胞表达的HLA-A2二聚体,检测其浓度;应用SPA亲和层析和两步法离子交换层析技术分别纯化HLA-A2二聚体,并比较2种方法纯化HLA-A2二聚体的效率.结果 7A2D细胞可表达正确构象的HLA-A2二聚体,Western blot检测显示融合蛋白的分子量与预期大小一致,7A2D细胞上清中HLA-A2二聚体的浓度为4.4μg/mL.SPA亲和层析法中pH3.0的洗脱条件使大部分的HLA-A2二聚体发生了变性反应,纯化后构象正确的HLA-A2二聚体纯度为(10.4±1.3)％,回收率仅为(7.3±1.1)％;两步离子交换层析后HLA-A2二聚体纯度为(72.9±4.6)％、回收率为(51.9±6.5)％,均显著高于SPA亲和层析法.结论 建立了一种纯化条件相对温和的两步法离子交换层析纯化方法,经过该方法制备获得的高纯度与较高浓度的HLA-A2二聚体可保持正确的空间构象,达到纯化与浓缩的目的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴雄文	华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系	67	404	11.0	17.0
2	梁智辉	华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系	34	186	6.0	12.0
3	翁秀芳	华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系	23	65	4.0	7.0
4	杨敬	华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系	14	27	3.0	4.0