集胞藻PCC6803中α-酮戊二酸脱羧酶的原核表达分析

• 作者: 刘志文 张伟 李志敏 李至敏 王小琴 谢琮琮
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 集胞藻PCC6803 α-酮戊二酸脱羧酶 原核表达 sll1981基因 分子伴侣
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术与工程
• 页码范围: 597-607
• 页数: 11页
• 分类号: Q786
• 字数: 7841字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2020069

摘要

[目的]α-酮戊二酸脱羧酶(α-ketoglutaric acid decarboxylase,α-KGD)是蓝细菌三羧酸循环途径中的一个关键酶.试验旨在优化集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白的原核表达方法,并对不同表达方法获得的重组sll1981蛋白进行活性测定.[方法]利用分子生物学技术构建含有sll1981基因的多种表达载体,通过SDS-PAGE分析这些表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达和可溶性情况,利用Ni-NTA亲和层析分离纯化重组sll1981蛋白,然后通过酶偶联法测定重组sll1981蛋白的催化活性.[结果]含有sll1981基因的不同表达载体在大肠杆菌表达系统中的表达良好,然而重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性差异较大.[结论]当pET28b-sll1981质粒与pTf16分子伴侣质粒在大肠杆菌中共表达时重组sll1981蛋白的可溶性和催化活性均为最佳.酶动力学测试表明集胞藻PCC6803中sll1981基因编码蛋白具有α-酮戊二酸脱羧酶功能.为进一步研究α-酮戊二酸脱羧酶的结构功能关系及催化机制提供重要基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢琮琮	江西农业大学生物科学与工程学院	3	1	1.0	1.0
2	李至敏	江西农业大学理学院	10	7	2.0	2.0
3	王小琴	江西农业大学生物科学与工程学院	13	39	3.0	6.0
4	张伟	江西农业大学生物科学与工程学院	9	63	4.0	7.0
5	李志敏	江西农业大学生物科学与工程学院	9	7	2.0	2.0
6	刘志文	江西农业大学生物科学与工程学院	19	26	3.0	4.0