肺炎链球菌StkP/CiaR组成耐药相关二元信号传导系统的分析与鉴定

• 作者: 严杰 周洋 孙爱华 黄燕颖 龙聪
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 肺炎链球菌 耐药性 丝氨酸/苏氨酸激酶 反应调节蛋白 二元信号传导系统
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 437-443
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112309-20191012-00325

摘要

目的 确定肺炎链球菌β-内酰胺抗生素耐药相关胞内应答调节蛋白CiaR能与跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶StkP结合组成StkP/CiaR二元信号传导系统(TCSS).方法 采用PCR扩增stkP基因胞内区片段(IC-stkP),T-A克隆测序确认序列正确后构建其原核表达系统.SDS-PAGE检查IC-stkP片段和我们以往构建的ciaR基因原核表达系统目的重组蛋白rIC-StkP和rCiaR表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rIC-StkP和rCiaR.采用Co-IP和LC-MS/MS鉴定rIC-StkP捕获的肺炎链球菌靶蛋白.采用等离子共振法(SPR)和等温滴定量热法(ITC)检测rCiaR与rIC-StkP结合能力.结果 所构建的IC-stkP片段原核表达系统能有效表达rIC-StkP.SDS-PAGE结果显示提纯的rIC-StkP和rCiaR在胶上均为单一蛋白质条带.CiaR可与rIC-StkP特异性共沉淀,其3个裂解肽位于CiaR分子内且序列完全相符.SPR和ITC结果显示,rCiaR与rIC-StkP呈高亲和力强结合,其KD值分别为1.526×10-9 mol/L和1.980× 10-6 mol/L.结论 肺炎链球菌CiaR可作为StkP激酶下游应答调节蛋白组成StkP/CiaR-TCSS.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
2	孙爱华	杭州医学院基础医学与法医学院	24	82	6.0	8.0
3	龙聪	江苏省靖江市人民医院检验科	1	0	0.0	0.0
4	黄燕颖	杭州市红十字会医院病理科	1	0	0.0	0.0
5	周洋	江苏省靖江市人民医院科研部	1	0	0.0	0.0