H9和H10亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 张民秀 张艳芳 曾婷婷 李丹 李孟 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽流感病毒 H9亚型 H10亚型 M基因 三重RT-PCR 检测
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医
• 页码范围: 113-117
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4435字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19386/j.cnki.jxnyxb.2020.04.20

摘要

根据GenBank中H9和H10亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,并优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立了可同时鉴别检测H9和H10亚型AIV的三重RT-PCR检测方法.特异性实验结果表明,该方法可以特异性地扩增出H9、H10亚型AIV及M基因对应大小的目的条带,而对其余亚型AIV仅M基因出现特异性条带,其它禽病病原体均未扩增出任何特异性条带.敏感性实验结果表明,该方法对H9、H10亚型HA基因及M基因质粒的扩增下限均为5×104拷贝/μL.此外,该方法对临床样品的检测结果与病毒分离及测序结果完全一致.