流行性出血病病毒(EHDV)血清型特异性荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用

• 作者: 宋子昂 廖德芳 朱建波 李华春 李卓然 李占鸿 杨恒 杨振兴 谢佳芮
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 流行性出血病病毒(EHDV) 血清型 荧光定量RT-PCR 分子诊断
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 动物病毒研究论著
• 页码范围: 897-906
• 页数: 10页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003750

摘要

流行性出血病病毒(EHDV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,目前世界范围已发现9种血清型的EHDV,本研究旨在建立EHDV的血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)诊断技术.以决定EHDV血清型的基因节段2(Seg-2)作为靶基因,设计8对特异性扩增引物和TaqMan探针,以不同血清型EHDV代表毒株的cDNA为模板,分析检测方法特异性、敏感性;以不同血清型的EHDV分离毒株及临床血液样本为检测对象,分析该方法的实际检测效果.实验结果显示:建立的EHDV血清型特异性qRT-PCR检测方法具有高度的特异性和灵敏性,可准确鉴定不同血清型EHDV,与蓝舌病病毒、中山病病毒和阿卡斑病毒之间均无交叉反应;qRT-PCR反应的扩增效率均达到90％以上,对不同血清型EHDV核酸检测灵敏度在24拷贝/μL～44拷贝/μL之间.对我国分离的31株EHDV进行血清型qRT-PCR鉴定,结果显示分离的EHDV分别为EHDV-1(6株)、EHDV-5(9株)、EHDV-6(11株)、EHDV-7(2株)与EHDV-10(3株).对不同血清型EHDV感染动物的血液样本检测结果显示,本方法能在动物感染EHDV早期鉴定出病毒的血清型,与血液样本中分离EHDV毒株的血清型鉴定结果一致.本研究建立的EHDV血清型荧光定量RT-PCR定型方法具特异性强、灵敏度高和耗时少等优点,可用于动物感染EHDV血清型的快速与准确诊断,具有良好的应用与推广价值.