利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建CDH1基因敲除的人乳腺癌MCF-7稳定细胞系

• 作者: 孙强 张波 朱一超 王征旭 郑幽 高伟健
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: CDH1基因 MCF-7细胞 CRISPR-Cas9
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 155-159,239
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.02.005

摘要

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建CDH1基因缺失的人乳腺癌MCF-7稳定细胞系.方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对CDH1基因的sgRNA,以lentiCRISPR v2质粒为骨架构建能表达此sgRNA和Cas9蛋白的重组质粒.测序鉴定后,将重组质粒与逆转录病毒包装质粒VSVG、PAX2在氯化钙介导下共同转入HEK293T细胞进行病毒包装,转染48 h后收集病毒上清,直接感染人乳腺癌MCF-7细胞.采用嘌呤霉素筛选CDH1缺失的乳腺癌MCF-7细胞,通过DNA测序、Western印迹及免疫荧光染色实验验证获得的MCF-7细胞.结果:构建了靶向CDH1的CRISPR/Cas9质粒;DNA测序和Western印迹实验结果表明获得了稳定敲除CDH1的人乳腺癌MCF-7细胞.免疫荧光染色结果显示,相比对照组,稳定敲除CDH1的MCF-7细胞中已无法明显观察到E-钙黏蛋白的表达分布.结论:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了CDH1基因缺失的MCF7细胞系,为进一步研究CDH1在肿瘤免疫治疗中的作用提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张波	军事医学研究院生物工程研究所	10	51	4.0	7.0
2	孙强	军事医学研究院生物工程研究所	9	19	3.0	4.0
3	朱一超	军事医学研究院生物工程研究所	2	0	0.0	0.0
5	高伟健		2	0	0.0	0.0
7	王征旭	解放军总医院第七医学中心生物治疗中心	2	0	0.0	0.0
12	郑幽	军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0