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芒柄花素抑制RANKL诱导破骨细胞分化的实验研究
芒柄花素抑制RANKL诱导破骨细胞分化的实验研究
作者:
俞鹏飞
姜宏
尤武林
洪一波
王建伟
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
芒柄花素
骨髓-单核巨噬细胞
破骨细胞生成
抗酒石酸酸性磷酸酶
摘要:
目的:建立RANKL诱导的破骨细胞体外研究模型,阐述活血化瘀中药鸡血藤有效组分芒柄花素(for-mononetin,FO)调控小鼠骨髓单核-巨噬细胞(BMMs)向破骨细胞分化和功能的影响,探讨其抑制破骨细胞分化的分子机制.方法:取20只4~6周龄清洁级C57/BL6小鼠,雌雄各10只,体重(20±2)g,无菌条件下分离出股骨和胫骨内BMMs,用α-MEM培养基进行体外培养和增殖.BMMs在加入M-CSF和不同浓度的芒柄花素(5~50 μM)分别培养4 d后进行细胞增殖与毒性的CCK8检测.将生长状态良好的BMMs依次加入M-CSF和RANKL诱导破骨细胞分化,对照组无特殊处理,DMSO对照组加入DMSO溶剂,各观察组分别加入不同浓度芒柄花素(1~20 μM),分别进行培养6 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,对破骨细胞的进行计数和统计分析.分别在破骨细胞培养的1、2 d收取总蛋白和磷酸化蛋白,Western blot检测破骨细胞分化中关键转录因子NFATc1和c-Fos的表达以及磷酸化蛋白ERK表达;在培养的4 d提取RNA,Real-Time PCR检测破骨细胞相关基因CTSK、TRAP、MMP9和Car2的活性.结果:CCK8检测结果提示芒柄花素能够剂量依赖性地抑制BMMs的活性,在≤20 μM的安全浓度范围内对BMMs细胞生长无明显毒性效应(P=0.278>0.05).TRAP染色结果发现芒柄花素在(1~20 μM)浓度范围内能够剂量依赖性的抑制破骨细胞的生成,尤其是10 μM能够显著抑制破骨细胞的生成(P=0.000<0.05).Western blot检测表明芒柄花素(10 μM)能显著抑制破骨细胞分化关键蛋白NFATc1和c-Fos的表达,而对磷酸化蛋白ERK的表达未见明显的作用.在破骨细胞功能上,Real-Time PCR检测芒柄花素(10 μM)能著抑制破骨细胞功能相关基因CTSK(P=0.000<0.05)、TRAP(P=0.000<0.05)、MMP9(P=0.000<0.05)和Car2(P=0.000<0.05)的表达.结论:鸡血藤有效组分芒柄花素能够抑制原代骨髓单核-巨噬细胞向破骨细胞增殖和分化,并下调破骨细胞骨吸收功能相关蛋白和基因的表达,可能是其防治股骨头坏死中骨破坏及塌陷的机制之一.
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文献信息
篇名
芒柄花素抑制RANKL诱导破骨细胞分化的实验研究
来源期刊
中国骨伤
学科
医学
关键词
芒柄花素
骨髓-单核巨噬细胞
破骨细胞生成
抗酒石酸酸性磷酸酶
年,卷(期)
2020,(1)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
64-70
页数
7页
分类号
R-332
字数
6210字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1003-0034.2020.01.012
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作者信息
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俞鹏飞
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破骨细胞生成
抗酒石酸酸性磷酸酶
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期刊影响力
中国骨伤
主办单位:
中国中西医结合学会
中国中医研究院
出版周期:
月刊
ISSN:
1003-0034
CN:
11-2483/R
开本:
大16开
出版地:
北京市东直门内南小街甲16号
邮发代号:
82-393
创刊时间:
1987
语种:
chi
出版文献量(篇)
9227
总下载数(次)
1
总被引数(次)
61834
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