茶树CssHSP18.1基因克隆及表达分析

• 作者: 宁娜 方远鹏 李向阳 杨再福 王勇 蒋君梅 谢鑫 陈美晴
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 CssHSP18.1 基因克隆 生物信息学分析 胁迫 表达分析
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 页码范围: 328-340
• 页数: 13页
• 分类号: S571.1|Q52
• 字数: 6463字
• 语种: 中文

摘要

sHSPs基因家族可编码一类小分子的热激蛋白,广泛分布于植物中,具有分子伴侣的功能,在植物抵抗逆境胁迫中起着重要作用.通过基因克隆的方法,获得1个茶树CssHSP18.1基因的开放阅读框(Open reading frame,ORF),其全长480 bp,编码159个氨基酸.生物信息学分析表明,CssHSP18.1蛋白含有1个典型HSP20结构域,相对分子质量约为18.25 kDa,等电点为5.68,偏酸性,与栎和苹果亲缘关系最近,无信号肽与跨膜结构.RT-qPCR分析表明,CssHSP18.1在甘露醇(D-Mannitol)处理下表达量低于对照组;γ-氨基丁酸(GABA)能促进该基因的表达,在处理后1 h时表达量达到峰值;吲哚乙酸(IAA)和聚乙二醇(PEG 6000)处理后,CssHSP18.1在0.5 h时表达量最高,即GABA、IAA、PEG 6000均可诱导CssHSP18.1的表达.为获得CssHSP18.1可溶性蛋白,构建了pET-28a-CssHSP18.1重组质粒进行原核表达,并分别对表达菌株、诱导温度以及IPTG(异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)诱导浓度进行优化.结果显示,CssHSP18.1蛋白最佳表达菌株为BL21(DE3),最佳诱导温度和IPTG浓度分别为30℃和1.2 mmol·L-1.最后,采用Western blot对表达的CssHSP18.1蛋白进行验证.本研究为进一步揭示CssHSP18.1基因的生物学功能提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王勇	贵州大学农学院	75	108	6.0	7.0
2	李向阳	贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地教育部重点实验室精细化工研究开发中心	13	26	3.0	5.0
3	谢鑫	贵州大学农学院	20	30	3.0	5.0
4	蒋君梅	贵州大学农学院	10	1	1.0	1.0
5	杨再福	贵州大学农学院	11	25	2.0	5.0
6	方远鹏	贵州大学农学院	6	0	0.0	0.0
7	陈美晴	贵州大学农学院	4	0	0.0	0.0
8	宁娜	贵州大学农学院	2	0	0.0	0.0