猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用

• 作者: 吴晓燕 孙盼盼 彭喆 徐绍建 时建立 李俊 王妍 王硕
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 诊断
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1419-1428
• 页数: 10页
• 分类号: S852.62
• 字数: 5846字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.06.025

摘要

旨在采用环介导等温扩增(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)相结合的方法,建立一种快速、特异,过程可视化的猪肺炎支原体(M yco plasmah yo pneumoniae,Mhp)检测方法.针对猪肺炎支原体(Mhp) P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,进行LAMP扩增反应.将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测.经优化,LAMP最佳反应条件为65℃,反应15 min,从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右,比常规PCR技术缩短近2h.LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体(Mhp),对猪鼻支原体(Mhr)及猪圆环病毒(PCV)等常见猪病病原的检测结果为阴性.灵敏性试验表明,LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×100个拷贝DNA,是普通PCR的1 000倍.利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性,国标PCR方法可检测到56份阳性,符合率可达90.90％.综上,本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测,而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值,有望发展成为Mhp快速检测的有效手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王硕		18	95	4.0	9.0
2	时建立	山东省农业科学院畜牧兽医研究所	6	18	3.0	4.0
3	徐绍建	山东省农业科学院畜牧兽医研究所	7	22	2.0	4.0
4	彭喆	山东省农业科学院畜牧兽医研究所	3	13	2.0	3.0
5	李俊		15	53	4.0	6.0
6	吴晓燕	山东省农业科学院畜牧兽医研究所	4	29	3.0	4.0
8	王妍		4	12	2.0	3.0
9	孙盼盼		1	0	0.0	0.0