红色荧光金葡菌假体感染临床株的构建

• 作者: 余进龙 张飞洋 朱崇尊 汤瑾 沈灏 王坚镪 蒋峰 郭阁永
• 来源期刊: 中华关节外科杂志（电子版）
• 关键词: 葡萄球菌,金黄色 假体相关感染 荧光 巨噬细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 159-166
• 页数: 8页
• 字数: 6358字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-134X.2020.02.006

摘要

目的 建立红色荧光标记金黄色葡萄球菌(金葡菌)假体感染(PJI)临床株,探究工具菌的生物学特性及和初步应用可行性.方法 通过分子克隆手段构建mCherry红色荧光表达质粒,通过电转化和噬菌体转导构建红色荧光标记金葡菌PJI临床株.通过生长曲线检测,体外成膜和生物量分析和荧光强度测量鉴定工具菌生物学特性.采用RAW264.7细胞株、工具菌建立共培养模型.采用该模型示踪不同锌离子浓度处理的巨噬细胞对于荧光PJI金葡菌吞噬能力.使用独立样本t检验、重复测量方差分析对定量数据进行统计.结果 使用Gibson系统成功构建了荧光表达质粒pRMC2-pts-mCherry,并且使用噬菌体Phage11将该质粒成功导入金葡菌假体感染临床株ST1792.较之于野生株ST1792,荧光金葡菌ST1792-pRMC2-pts-mCherry两者的生长曲线没有统计学差异(F=0.012,P>0.05).在0.5％葡萄糖胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSBG)内,两者的生物膜光密度(OD)值分别为(3.700±0.003)和(3.715±0.042)(t=0.6056,P>0.05);10％滑液中生物膜OD值为(3.682±0.084)和(3.648±0.095)(t=0.474,P>0.05).使用动物活体成像系统(IVIS)检测荧光强度,24 h荧光强度为(1.95±0.04)、48 h荧光为(1.94±0.13)、72 h荧光强度为(1.95±0.04),荧光强度72 h稳定(F=2.944,P>0.05).通过荧光显微镜观察以及菌落形成单位(CFU)计数评价发现,使用锌离子浓度30～60μmol/L不含抗生素的培养基处理RAW264.724 h,可以促进其吞噬金葡菌,其中30μmol/L吞噬率为(44±4)％(t=4.75,P<0.01)、45μmol/L吞噬率为(45±6)％(t=4.086,P<0.05)、60μmol/L离子处理的巨噬细胞,其吞噬率为(38±4)％(t=4.786,P<0.01).结论 本研究成功构建红色荧光临床PJI金葡菌,并验证其用于PJI相关体外吞噬研究的可行性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈灏	上海市第六人民医院骨科	24	383	11.0	19.0
2	汤瑾	上海市第六人民医院检验科	5	4	1.0	2.0
3	王坚镪	上海市第六人民医院检验科	3	0	0.0	0.0
4	朱崇尊	上海市第六人民医院骨科	1	0	0.0	0.0
5	余进龙	上海市第六人民医院骨科	1	0	0.0	0.0
6	郭阁永	上海市第六人民医院骨科	1	0	0.0	0.0
7	蒋峰	上海市第六人民医院骨科	1	0	0.0	0.0
8	张飞洋	上海市第六人民医院骨科	1	0	0.0	0.0