产气荚膜梭菌实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法的建立和比较

• 作者: 刘立兵 孙晓霞 李睿文 王建昌 王金凤 袁万哲 陈志敏
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 医学
• 关键词: 产气荚膜梭菌 plc基因 实时荧光聚合酶重组酶扩增 实时荧光聚合酶链式反应
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 安全检测
• 页码范围: 268-272
• 页数: 5页
• 分类号: R155.5|Q93.3
• 字数: 4690字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20181026-307

摘要

根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立产气荚膜梭菌的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光聚合酶重组酶扩增(recombinase polymerase?amplification,RPA)检测方法.特异性分析结果表明,建立的两种检测方法特异性强,仅对产气荚膜梭菌有特异性扩增,对其他细菌均无扩增;两种方法的检出限均为1.3 pg/μL.在人工污染模拟样品的检测中,两种方法的检出限均为1.0×102 CFU/mL;实时荧光RPA需要3～13 min即可实现对所有阳性样品的检测,而实时荧光PCR则需要24～46 min(Ct值为17.45～33.65).实时荧光RPA方法在检测时间、操作方便性和仪器便携性方面,明显优于实时荧光PCR方法.本研究建立的实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法特异性强、灵敏性高、操作方便,为实验设备装备较差的基层检测实验室和疫情突发现场产气荚膜梭菌的快速检测提供有效技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李睿文	河北农业大学动物医学院	31	128	7.0	11.0
2	袁万哲	河北农业大学动物医学院	76	296	8.0	14.0