草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定及其对肝细胞miR-122/33和免疫相关基因表达的影响

• 作者: 卢荣华 孟晓林 张文雅 张玉茹 杨丽萍 王俊丽 聂国兴
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 肝细胞 外泌体 分离 鉴定 免疫调节
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 页码范围: 1-10
• 页数: 10页
• 分类号: Q785|S917.4
• 字数: 5180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20181211575

摘要

外泌体是具有磷脂双分子膜结构的纳米级囊泡,能够参与机体多种生理过程.实验探讨了草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定方法,并初步研究外泌体对草鱼肝细胞中miRNAs及免疫相关基因表达的影响.实验以草鱼肝细胞L8824为材料,通过超速离心获得外泌体,利用电子显微镜观察外泌体形态,采用纳米颗粒示踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体粒径和数量,同时利用Western blot分析其标志蛋白CD63的表达,最后用正常肝细胞和油酸诱导的脂肪肝细胞源外泌体孵育草鱼肝细胞,通过Real-time qPCR技术检测两种不同来源的外泌体对草鱼肝细胞中miR-122/33及免疫相关基因(TNF-α,NF-κB,IL-1β,IL-6和IL-10)转录水平的影响.结果显示,草鱼肝细胞外泌体为30～150 nm的不均匀囊泡,呈圆形或椭圆形,有完整的膜结构;外泌体标志蛋白CD63呈阳性表达;NTA技术检测显示外泌体囊泡占所有囊泡的50％以上;脂肪肝细胞源外泌体显著提高了肝细胞中miR-122及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA转录水平.研究表明,通过超速离心法可成功分离草鱼肝细胞外泌体,且脂肪肝细胞源外泌体在草鱼肝细胞免疫调节中可能发挥重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	聂国兴	河南师范大学水产学院	165	1275	18.0	30.0
2	王俊丽	河南师范大学生命科学学院	44	518	12.0	21.0
3	卢荣华	河南师范大学水产学院	28	58	5.0	7.0
4	杨丽萍	河南师范大学水产学院	11	23	3.0	4.0
5	孟晓林	河南师范大学水产学院	31	24	4.0	4.0
6	张文雅	河南师范大学水产学院	4	0	0.0	0.0
7	张玉茹	河南师范大学水产学院	12	2	1.0	1.0