褐牙鲆中miRNAs与甲状腺激素受体TRβ的相互作用研究

• 作者: 付元帅 刘素萍 喻杰 张俊玲 施志仪
• 来源期刊: 水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 褐牙鲆 miRNA TRβ pmirGLO-TRβ-3′-UTR 双荧光素酶报告基因技术
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与应用
• 页码范围: 299-305
• 页数: 7页
• 分类号: S917
• 字数: 4945字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16378/j.cnki.1003-1111.2020.03.001

摘要

甲状腺激素通过与其受体结合对褐牙鲆变态起重要的调控作用,而miRNAs通过结合靶基因3′-UTR在转录后水平调节靶基因的表达.为探讨miRNAs在褐牙鲆变态中的作用,通过生物信息学方法预测褐牙鲆TRβ基因3′-UTR存在的miRNAs结合位点,并利用3′-RACE方法克隆TRβ基因的3′-UTR序列,通过体外DNA重组技术构建应用于miRNAs靶向基因检测的双荧光素酶重组报告载体,利用细胞转染和双荧光素酶报告技术分析多个miRNAs与TRβ基因的作用关系.研究结果显示,克隆得到了一段长为437 bp的褐牙鲆TRβ基因的3′-UTR序列,发现3′-UTR序列上存在pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p、pol-miR-138和pol-miR-125a*的结合位点,成功构建了双荧光素酶重组报告载体,命名为pmirGLO-T Rβ-3′-UTR.双荧光素酶报告分析结果表明,pol-miR-125a、pol-miR-214、pol-miR-460-5p和pol-miR-138均为作用于褐牙鲆TRβ的靶向miRNAs,而pol-miR-125a*对TRβ基因无直接的调节作用.研究结果将为后续深入研究miRNAs与TRβ在褐牙鲆变态发育中的功能及其作用机制提供基础.