稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白的细胞系Vero-SLAM-M的构建

• 作者: 单虎 杨雅明 林佳旭 王介淞 黄娟
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 犬瘟热病毒 基质蛋白 Vero-SLAM-M细胞系
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 实验观察
• 页码范围: 20-24,封3
• 页数: 6页
• 分类号: S858.292
• 语种: 中文

摘要

为了建立稳定表达犬瘟热病毒基质蛋白(M)的细胞系,从犬瘟热病毒狐狸源分离毒株SD16F中扩增出M基因,将其克隆至真核表达质粒pCI-neo的Xho Ⅰ/NotⅠ位点处.重组质粒经PCR、Xho L/NotⅠ双酶切及测序鉴定后转染Vero-SLAM细胞,利用G418抗性压力筛选阳性细胞,并采用RT-PCR及间接免疫荧光试验(IFA)鉴定转染细胞中M蛋白的表达情况.结果 表明,成功构建了重组质粒pCI-neo-M,瞬时及稳定转染Vero-SLAM细胞后,RT-PCR和IFA能够检测到M基因的转录和表达,且G418筛选后细胞与其亲本Vero-SLAM细胞生长特性基本一致,表明获得1株能稳定表达M蛋白的细胞系,命名为Vero-SLAM-M.