SP110基因过表达慢病毒载体的构建与包装

• 作者: 刘丙雨 吴江东 张万江 李新月 程江 贾鹏霞 马雅静
• 来源期刊: 转化医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SP110基因 慢病毒构建 慢病毒包装
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 75-78
• 页数: 4页
• 分类号: R349.6
• 字数: 3627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-3097.2020.02.003

摘要

目的 构建核体蛋白SP110基因过表达慢病毒载体,并进行慢病毒包装,为研究SP110在结核病中的作用机制奠定基础.方法 利用PCR技术获得SP110基因序列并将其插入到慢病毒穿梭质粒LV5中,获得重组慢病毒质粒V-SP110,经酶切鉴定及DNA测序鉴定后,用RNAi-Mate将重组质粒和慢病毒包装质粒系统(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)包装成重组慢病毒颗粒,共转染293T细胞,包装产生慢病毒.通过荧光显微镜或FACS计数荧光细胞,结合稀释倍数计算病毒滴度.结果 酶切鉴定结果显示产生约1 650 bp的片段,片段大小与SP110基因cDNA大小一致.DNA测序比对测序结果与预期SP110基因序列完全一致,说明SP110基因正确插入载体中,成功构建了SP110基因过表达载体.经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为1.0× 108 TU/mL的重组慢病毒LV5-SP 110.结论 SP110基因过表达慢病毒载体构建与包装成功完成,为进一步探讨SP110基因在结核病发生发展中的作用提供工具.