番茄褪绿病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用

• 作者: 丁天波 李洁 王吉成 褚栋
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 番茄褪绿病毒 烟粉虱 外壳蛋白 携毒率 扩增效率 TaqMan RT-qPCR
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 159-165
• 页数: 7页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2020.02.005

摘要

[目的]本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术,快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV).[方法]根据ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了TaqMan RT-qPCR方法;与常规PCR检测进行比较,检测该方法的灵敏度与特异性;并应用该方法对单头烟粉虱成虫体内ToCV进行了快速检测.[结果]本研究构建的TaqMan RT-qPCR检测ToCV的标准曲线,其循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,扩增效率为98％.该方法对ToCV的最低检测浓度为8.3×10 copies/μL,灵敏度是常规RT-PCR的1 000倍.该方法与田间番茄两种重要病毒番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)和番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)检测无交叉反应.单头烟粉虱成虫ToCV检测结果表明,温室内ToCV侵染植株上烟粉虱携毒率为100％,田间烟粉虱的携毒率为30％.[结论]本研究建立的TaqMan RT-qPCR检测方法,可快速有效检测单头烟粉虱体内ToCV携毒情况,为该病毒病的防控提供了技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	褚栋	青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室	25	200	9.0	13.0
2	丁天波	青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室	6	37	4.0	6.0
3	李洁	青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室	6	35	4.0	5.0
4	王吉成	青岛农业大学植物医学学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室	1	0	0.0	0.0