信号肽对猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中分泌表达的影响

• 作者: 冯华 刘运超 宋亚鹏 张改平 白怡霖 魏蔷
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 信号肽 E2蛋白 猪瘟病毒(CSFV) 分泌表达
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 120-127
• 页数: 8页
• 分类号: S852.651
• 字数: 5010字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.01.014

摘要

旨在通过引入信号肽序列实现猪瘟病毒E2蛋白在杆状病毒表达系统中的高效表达.首先将内源信号肽(简称endo)、蜂素信号肽(简称mel)及gp67信号肽(简称gp67)分别引入pFastBac1载体,随后插入E2基因,构建重组质粒.随后将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选得到重组黏粒,将重组黏粒转染sf21细胞以得到杆状病毒.经扩增后大量感染细胞,检测E2蛋白表达情况,利用镍填料纯化得到E2蛋白,并进行蛋白糖基化水平鉴定及蛋白免疫原性分析.PCR鉴定结果显示成功构建了重组质粒.挑选白斑进行PCR鉴定,证实得到重组黏粒.Western blot检测结果表明,E2蛋白实现了分泌表达,进一步比较细胞培养上清中E2蛋白的表达水平,确定gp67信号肽介导的E2蛋白分泌表达量最高.经镍填料纯化得到E2蛋白,SDS-PAGE结果显示其纯度较高,产率为25mg·L-1.通过ELISA分析其抗原性,结果表明纯化所得E2蛋白能特异性识别猪瘟阳性血清中的抗体,其抗原性良好.将纯化后的E2蛋白添加ISA201佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,阻断ELISA结果显示,免疫后14 d即产生较高水平的猪瘟特异性抗体,表明E2蛋白免疫原性良好.本研究为E2亚单位疫苗的研制奠定了基础.