环介导等温扩增检测恶性疟原虫与其他疟原虫的效果评价

• 作者: 周水茂 杨燕 涂祖武 贾西帅 陈芳
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 疟原虫 LAMP 巢式PCR 恶性疟原虫
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 423-428
• 页数: 6页
• 分类号: R382.31
• 语种: 中文
• DOI: 10.12140/j.issn.1000-7423.2020.04.004

摘要

目的 采用环介导等温扩增(LAMP)方法检测疟原虫DNA,并评价其检测效果. 方法 采集2013-2018年从疟疾流行区回国人员中确诊为疟疾患者的滤纸血样.根据疟原虫的18S rRNA序列,使用PrimerExplorer V5软件设计恶性疟原虫与非恶性疟原虫LAMP引物,建立疟原虫LAMP检测方法,进行敏感性、特异性、灵敏度和扩增效率评价,并与巢式PCR比较.检测钙黄绿素指示剂对LAMP反应的影响. 结果 LAMP和巢式PCR各检测96份疟疾患者血样(47份恶性疟血样和49份其他疟疾血样),均检出93份疟原虫阳性.LAMP检测结果显示,恶性疟血样均被检出,非恶性疟假阴性率为2.1％,10份利什曼原虫玻片血、8份日本血吸虫感染兔血和38份健康人血均为阴性,与巢式PCR检测结果具有极高的一致性(Kappa值=0.956).LAMP检测恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫的灵敏度分别为25、3、4、2个疟原虫/μl血.扩增效率检测结果显示,4种疟原虫LAMP反应出现浊度时间(Tt值)均小于60 min,速率曲线峰值(Df)达0.14以上,其中恶性疟原虫扩增效率较高,Tt值为20.4 min,Df达0.16.可视化LAMP检测结果显示,钙黄绿素指示剂对不同种疟原虫LAMP反应延时约8～22 min,Df下降约21％～35％. 结论 LAMP技术检测疟原虫有高度敏感性、特异性和灵敏度,且可视,具有在现场及基层医疗机构应用前景.