海带配子体γ-碳酸酐酶的基因克隆与功能鉴定

• 作者: 周志刚 毕燕会 许玲
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 海带 碳酸酐酶 亚型 基因克隆 功能鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 页码范围: 742-753
• 页数: 12页
• 分类号: Q785|S917.3
• 字数: 9841字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20190511810

摘要

本研究采用cDNA末端快速扩增(RACE)等技术获得海带配子体细胞一个γ-亚型碳酸酐酶(CA)基因的cDNA及DNA全长序列.其cDNA长为1618 bp,编码由305个氨基酸组成的蛋白;DNA长为11812 bp,具6个内含子,将开放阅读框(ORF)分割成7个外显子;其具有一个gamma-CA的结构域,并具有一个独特的左手平行β-螺旋结构域;由36个CA的氨基酸序列所构建的聚类图显示,该CA与其他物种的γ-CA聚为一支.因而,将该克隆的基因命名为Sjγ-CA.为了解其编码蛋白的功能,将Sjγ-CA的ORF亚克隆至表达载体pET28a上,导入大肠杆菌表达菌株BL21中,培养并诱导目的基因表达,亲和层析以纯化重组蛋白.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE电泳)、免疫印迹和质谱技术鉴定结果表明,纯化所获得的重组蛋白是Sjγ-CA.利用电极法和分光光度计法分别检测重组的Sjγ-CA在CO2与中的水合反应及在乙酸对硝基苯酯水解反应中的活性,结果显示,重组Sjγ-CA的水合酶比活力为0.82 U/mg,但没有酯酶活性,从而从功能上鉴定了Sjγ-CA.该研究为后续探讨Sjγ-CA在海带配子体乃至孢子体细胞或组织中的亚细胞定位等研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周志刚	上海海洋大学海洋生物科学国际联合研究中心	25	123	5.0	10.0
2	毕燕会	上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室	11	15	2.0	3.0
6	许玲	上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0