关节软骨细胞与CD105阳性滑膜间充质干细胞共培养并促进其成软骨分化

• 作者: 张松 王鹏程 胡海清
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 滑膜间充质干细胞 磁珠分选 成软骨分化 间接共培养
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 408-413
• 页数: 6页
• 分类号: R759
• 字数: 5264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2020.04.006

摘要

目的 使用Transwell小室将大鼠关节软骨细胞(ACC)和CD105阳性滑膜间充质干细胞(CD105+SMSC)进行间接共培养,研究共培养体系下CD105+SM SC成软骨分化的能力和伴随的炎症反应情况.方法 在体外分离培养大鼠SMSC,通过形态学观察和成骨、成脂、成软骨三系分化鉴定.使用磁珠分选方法 (MACS)筛选出表面标记为CD105阳性的细胞,并用免疫荧光和流式细胞学方法 鉴定.体外分离培养大鼠ACC,用形态学观察及甲苯胺蓝染色鉴定.ACC按一定比例(4:1,2:1,1:1,1:2,1:4)与CD105+SM SC在T ransw ell小室中间接共培养,另设单独培养的CD105+SMSC作阴性对照,CD105+SMSC+成软骨诱导培养液(chondrogenic culture medium,CCM)作阳性对照.在培养的第14天提取各组CD105+SMSC总RNA,使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测二型胶原(Col2A1),蛋白聚糖(aggrecan)、性别决定区Y框蛋白9(SOX-9)、转化生长因子-β3(TGF-β3)等相应的成软骨指标表达,检测聚蛋白多糖酶-5(ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Runt相关转录因子-2(RUNX-2)等炎症指标的表达.结果 分离培养后的SMSC可进行成骨、成脂、成软骨三系分化.MACS分选后可见免疫荧光和流式细胞学鉴定均提示CD105阳性.与软骨细胞间接共培养14 d后,Real-time PCR检测结果 示,与阴性对照组相比,2:1和1:1实验组的各成软骨指标较阴性对照组上升,ADAMTS-5和RUNX-2炎症指标无明显改变,MMP-3和M M P-13指标显著下降.结论 与ACC间接共培养可以促进CD105+SM SC向成软骨方向分化,并能够在一定程度上降低其分化过程中的炎症反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王鹏程	武汉大学中南医院急救中心	3	35	1.0	3.0