线粒体转录因子A和细胞色素c氧化酶途径对肿瘤坏死因子受体相关蛋白1调节大鼠缺氧心肌细胞能量生成的作用及机制

• 作者: 原莉莉 向飞 罗佳 胡建红 薛冬冬 贾杰只 黄跃生
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 肌细胞,心脏 缺氧 腺苷三磷酸 肿瘤坏死因子受体相关蛋白1 线粒体转录因子A 细胞色素c氧化酶
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 论著·脏器损害与并发症
• 页码范围: 651-657
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20190709-00295

摘要

目的 探讨线粒体转录因子A(TFAM)和细胞色素c氧化酶(COX)途径在肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)调节大鼠缺氧心肌细胞能量生成中的作用及机制. 方法 取135只1～3d龄SD大鼠乳鼠,分离培养心肌细胞.(1)取细胞,按随机数字表法(分组方法下同)分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧+TRAP1过表达对照组、缺氧+TRAP1过表达组,每组1瓶.常氧空白对照组细胞常规培养;缺氧空白对照组细胞常规培养后缺氧6h;缺氧+TRAP1过表达对照组、缺氧+TRAP1过表达组细胞常规培养后,分别加入TRAP1过表达空病毒载体、TRAP1过表达腺病毒载体病毒悬液转染48 h后缺氧6h.蛋白质印迹法检测各组细胞TFAM蛋白表达.(2)取细胞,分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧+ TRAP1过表达对照组、缺氧+TRAP1过表达组、缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组、缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰组,每组1孔,前4组细胞处理同实验(1)对应组别.缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组、缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰组细胞分别加入TFAM干扰空病毒载体、TFAM干扰腺病毒载体病毒悬液转染48 h,其他处理同缺氧+ TRAP1过表达组.采用ATP检测试剂盒及酶标仪检测细胞内ATP含量,采用COX活性检测试剂盒及酶标仪检测细胞内COX活性.(3)取细胞,分为常氧空白对照组、常氧+叠氮化钠组、缺氧空白对照组、缺氧+叠氮化钠组,每组1孔,常氧空白对照组和缺氧空白对照组细胞处理同实验(1)对应组别.常氧+叠氮化钠组细胞实验前30 min加入32 nmol叠氮化钠,缺氧+叠氮化钠组细胞缺氧前30 min加入32 nmol叠氮化钠后缺氧6h,同前检测ATP含量.以上实验均重复3次.对数据行单因素方差分析、LSD检验. 结果 (1)与常氧空白对照组比较,缺氧空白对照组细胞TFAM蛋白表达量明显下降(P＜0.01).与缺氧空白对照组和缺氧+TRAP1过表达对照组比较,缺氧+TRAP1过表达组细胞TFAM蛋白表达量明显升高(P＜0.01).(2)与常氧空白对照组(0.552±0.041、1.99±0.15)比较,缺氧空白对照组细胞COX活性(0.270±0.044)和ATP含量(1.09±0.11)均明显降低(P＜0.01).与缺氧空白对照组和缺氧+ TRAP1过表达对照组(0.269±0.042、1.17±0.12)比较,缺氧+ TRAP1过表达组和缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组细胞COX活性(0.412 ±0.032、0.404 ±0.016)和ATP含量(1.75±0.06、1.69 ±0.07)均明显升高(P＜0.01).与缺氧+TRAP1过表达组和缺氧+ TRAP1过表达+TFAM干扰对照组比较,缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰组细胞COX活性(0.261 ±0.036)和ATP含量(1.23 ±0.07)均明显降低(P＜0.01).(3)与常氧空白对照组比较,常氧+叠氮化钠组和缺氧空白对照组细胞ATP含量明显降低(P＜0.01).与缺氧空白对照组比较,缺氧+叠氮化钠组细胞ATP含量明显降低(P＜0.01). 结论 TRAP1能够通过上调TFAM表达来提高COX活性,最终减轻缺氧导致的大鼠心肌细胞能量生成受损.