转AtDME1基因'84K'杨的获得及目的基因诱导表达分析

• 作者: 吴晓娟 常英英 张冰玉 苏晓华 钟姗辰 鲁俊倩
• 来源期刊: 北京林业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 84K杨 转基因植株 去甲基化基因 化学诱导表达
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 林学
• 页码范围: 26-32
• 页数: 7页
• 分类号: S792.11|S722.5
• 字数: 4987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12171/j.1000?1522.20190068

摘要

[目的]DNA甲基化是一种重要的表观遗传标记,在植物生长发育、环境响应等过程中发挥重要作用.本研究将拟南芥去甲基化基因AtDME1导'84K'杨基因组中,通过化学诱导表达实验,研究AtDME1基因在转基因杨树中的诱导表达特性,为建立杨树甲基化诱导变异体系,进而实现杨树品种改良等奠定良好基础.[方法]以白杨派优良品种84K杨无菌苗叶片为受体材料,采用农杆菌介导法将化学诱导启动子与AtDME1基因导入'84K'杨;经过潮霉素筛选、常规PCR检测及DNA测序等方法对抗性植株进行鉴定.通过化学诱导剂17-β-雌二醇对随机挑选的1个转基因株系离体叶片进行诱导处理,处理时间为0、3、6、12、24、48、96、144 h,采用qRT-PCR检测处理叶片中外源基因AtDME1的表达量变化.[结果]本研究中,潮霉素分化筛选共获得了抗性芽224个,经生根筛选获得6株抗性植株,经分子检测证实这6株抗性植株均为转AtDME1基因植株,扩繁后分别标号为转基因AD-1～6.qRT-PCR检测结果显示,化学诱导剂17-β-雌二醇处理3 h时,目的基因AtDME1的表达量基本达到最大值,效果持续至12 h后逐渐减弱.[结论]化学诱导剂17-β-雌二醇能迅速有效地调控转基因杨树中AtDME1基因的表达,为进一步研究DME1基因在杨树基因组甲基化调控方面的作用机制奠定基础,也为杨树化学诱导表达特性的研究做好了铺垫.